顯微鏡在使用的過程中圖像的清晰度是最關鍵的一點，不同功能和倍率的物鏡通常都有規定的焦距，通過調節物鏡與被測物品的距離可獲得更清晰的圖像，這一操作過程就是”調焦”。

　　顯微鏡中10x物鏡是最常用的標準物鏡，一般調焦工作是從它開始，將物鏡位置轉換到10x鏡頭，調節工作臺高度，從目鏡中觀察聚焦效果繼續調節就好。從10x物鏡轉換到更低倍物鏡或更高倍物鏡，只需要輕微的調節就可以達到極佳焦距位置。許多金相檢驗的有關國家標準中是以100倍觀察條件下的標準圖譜為參照物，而100x的倍率則是通過顯微鏡自身標配的10x目鏡加配10x物鏡而來。

　　調焦操作注意物鏡轉換時不要用手直接觸碰物鏡，容易造成物鏡固定絲扣松動，光源傾斜。正確轉換操作是旋轉物鏡轉換器，在物鏡位置調正時會有“咔噠”的鎖緊裝置聲響，然后輕微推動轉塔確認是否有阻力即可。